Reticulocitos

RETICULOCITOS

Los reticulocitos son hematíes jóvenes recién salidos de la médula ósea y que todavía conservan algunas organelas citoplasmáticas, como las mitocondrias, los ribosomas y restos del aparato de Golgi. Para poder verlos con el microscopio es necesario teñirlos mediante un colorante sin fijación previa (colorante supravital), como el azul de cresil brillante. En estas condiciones aparecen teñidos de color azul con un punteado más o menos abundante, oscuro y agrupado en forma de retículo que se conoce como sustancia reticulofilamentosa y que corresponde en realidad a restos de ribosomas con artefactos. El tamaño de estas células es superior al de los hematíes adultos. 

Su número en sangre periférica oscila entre 0,5 y 1,5% de los hematíes maduros o, en cifras absolutas, de 25 a 75 x 10⁹/L.

El aumento de reticulocitos en sangre periférica es característico de las anemias de tipo regenerativo, en las que la médula ósea produce más serie roja en respuesta a la pérdida eritrocitaria (hemorragia) o a su destrucción patológica (hemólisis). Por el contrario, su número desciende constantemente en las anemias de origen medular (anemias arregenerativas), en las que existe una insuficiente producción eritrocitaria por aplasia o displasia de la médula ósea o por ocupación de ésta por células que comprometen la eritropoyesis (mieloptisis). El aumento del número de reticulocitos puede advertirse, simplemente, mediante la observación al microscopio de una extensión de sangre periférica correctamente teñida con la tinción panóptica. En efecto, en estos casos pueden verse hematíes con un color ligeramente azulado (policromasia o policromatofilia) o bien con un fino punteado de color azul (punteado basófilo). Ambas alteraciones del aspecto del hematíe obedecen al contenido ribosómico del hematíe joven comentado anteriormente, pero que adoptan una forma distinta a la del reticulocito por el hecho de que la tinción panóptica implica la fijación previa del eritrocito.

RECUENTO DE RETICULOCITOS

Propósito:

Los reticulocitos son eritrocitos más jóvenes y su número en la sangre es el mejor índice de la efectividad de la Eritropoyesis. Debido a la sencillez del método, éste sirve para evaluar seriadamente el funcionamiento medular como respuesta a tratamientos.

Principio:

El azul cresil brillante, que es un colorante supravital, tiñe los RNA residual, Ribosomas y Mitocondrias precipitados en los eritrocitos inmaduros.

Se cuentan los glóbulos rojos con retículo teñido y el resultado se expresa como porcentaje del número de glóbulos examinados.

Si se utiliza Citometria de Flujo el colorante a utilizar es “ Tiazol orange“ o Naranja de

Acridina que marcan el RNA, este método es de mayor significancia estadística ya que permite contar un numero mayor de células y posee una mayor sensibilidad.

Muestra:

Sangre venosa con EDTA o WINTROBE de no más de 6 horas de extraída debido a que los reticulocitos maduran “in vitro”.

Técnica :

Preparación del colorante:

Mezclamos 80ml de solución salina y  20ml de citrato sódico al 3%.

Pesamos 1g de azul de cresil brillante y lo disolvemos en la mezcla anterior.

Filtramos antes de usarlo

Tinción de los reticulocitos:

1.     Es una tinción supravital, es decir, se hace mientras las células aún están vivas.

Para ello, echamos 3 gotas de la solución colorante en un tubo de hemólisis y otras 3 gotas de sangre total previamente homogeneizda.

2.     Mezclamos suavemente y tapamos con papel parafilm. Introducimos en el baño de agua a 37ºC durante 5 minutos.

3.     Pasado este tiempo volvemos a homogenizar y tomamos una gota de la suspensión para depositarla en un porta.

4.     Realizamos una extensión y dejamos secar al aire.

Lectura de resultados:

Observamos la extensión con el objetivo de 100x.

Los hematíes se habrán teñido de color verde amarillento y los reticulocitos se diferencian porque presentan en su interior unos hilos finos de color azul.

Se deben contar entre 500 a 1000 hematíes en total en una zona donde éstos no se superpongan , y el cálculo del porcentaje de reticulocitos es el siguiente:

% reticulocitos = Nº de reticulocitos contados / Nº de hematíes contados x 100

Valores normales 

Adultos y niños: 0,5 a 1,5%

Recién Nacidos: 2,0 a 6,0%

Interpretacion de Resultados:

Se produce reticulopenia o disminución en la cifra de reticulocitos, en casos de aplasia medular, anemia ferropénica, anemia megaloblástica y anemias que cursan con dificultad en la eritropoyesis.

La cantidad de reticulocitos expresada en tanto por ciento es un valor relativo referido a una cifra normal de hematíes.

INDICE RETICULOCITARIO

El Índice Reticulocitario o Índice de Producción Reticulocitaria (IPR), suministra una

información más fidedigna sobre la capacidad regenerativa de la médula. La presencia en sangre periférica de macropolicromatófilos o eritroblastos significa habitualmente la incorporación de reticulocitos jóvenes que requieren de 2 a 3 días de maduración en sangre periférica y que pueden incrementar falsamente el IR, el que asume que todos los reticulocitos tienen una maduración periférica de un sólo día.

Dado que la cifra de reticulocitos puede estar aumentada por un incremento real en su

número o como consecuencia de un descenso de los hematíes maduros, en los casos de anemia es preferible corregir la cifra de reticulocitos mediante la siguiente fórmula:

Primera corrección:

Reticulocitos corregidos (%) =Reticulocitos paciente (%) x Hematocrito del  Paciente/Hematocrito normal para el paciente

Segunda corrección:

El período de maduración de los reticulocitos en sangre periférica está en función del

hematocrito.

VALOR HEMATOCRITO DÍAS DE MADURACIÓN

45% à1

35% à1,5

25% à2,0

15% à2,5

A partir del % de reticulocitos corregidos y el período de maduración, estamos en

condiciones de calcular el denominado IR.

IR = Reticulocitos corregidos (%)/ Período de maduración (días)

Valor Normal del IR: 1