Hemoglobina

HEMOGLOBINA

La hemoglobina (Hb) es una heteroproteína de la sangre, de color rojo característico, que transporta el oxígeno desde los órganos respiratorios hasta los tejidos, el dióxido de carbono desde los tejidos hasta los pulmones que lo eliminan y también participa en la regulación de pH de la sangre.

La hemoglobina es una proteína de estructura cuaternaria, que consta de cuatro subunidades. Esta proteína hace parte de la familia de las hemoproteínas, ya que posee un grupo hemo.

La concentración de la hemoglobina es una medida de hemoglobina total en sangre periférica, lo que refleja el numero de glóbulos rojos en la sangre.

El hematocrito en porcentaje suele ser tres veces la concentración de la hemoglobina en gramos por decilitro cuando los glóbulos rojos son de tamaño normal y contienen una cantidad normal de hemoglobina.

Niveles disminuidos indican anemia ( una reducción del numero de glóbulos rojos). Niveles aumentados indican eritrocitosis. Por otra parte, las alteraciones en el volumen de plasma repercuten en mayor medida en la concentración de hemoglobina. La ligera disminución de los valores Hb y del hematocrito durante el embarazo se corresponden tanto a la expansión del volumen sanguíneo debido al estado crónico de exceso de hidratación como al numero aumentado de globulos rojos. Las hemoglobinopatías, tales como la enfermedad de las células falciformes y la enfermedad de la hemoglobina C, se asocian también a niveles bajos de hemoglobina 

Método de la Cianmetahemoglobina (HiCN):

La Hemoglobina es intensamente coloreada y esta propiedad es utilizada para

estimar colorimétricamente su concentración en sangre. La hemoglobina en sangre es una mezcla de pigmentos, para su determinación

exacta es necesario preparar un derivado estable que incluya todas las formas de hemoglobina.

Principio: un volumen determinado de sangre se diluye con la solución disolvente Drabkin (ferricianuro potásico y cianuro potásico). El Ferricianuro oxida la hemoglobina a hemiglobinas (Hi; metahemoglobina)  y el cianuro potásico proporciona los iones de cianuro (CN-) formándose cianmetahemoglobina  (HiCN) que se lee en espectrofotómetro a 540 nm y se compara con una solución de HiCN estándar.

Solución Drabkin:

·      Ferricianuro potásico K3Fe(CN)6 200 mg

·      Cianuro potásico (CNK) 50 mg

·      Fosfato monopotásico (KH2PO4) 140 mg

·      Detergente no ionico 1 ml

·      Agua destilada hasta 1000 ml

*Se debe tener cuidado con la preparación de la solución de Drabkin, ya que las sales o soluciones de cianuro son venenosas.

Procedimiento:

1.     Se añaden 20 ul de sangre a 5 ml de disolvente (1:251).

2.     Mezclar suavemente

3.     Dejar en oscuridad por 10 min a temperatura ambiente.

4.     Leer a 540 nm.

5.     Medir la solución estándar ( de concentración conocida) en disolvente en la misma proporción de la muestra.

Curva de calibración :

En papel milimetrado anotar las DO en la ordenada y las concentraciones de hemoglobina en la abscisa. La curva sigue la Ley de Lambert -Beer  (donde K=C/DO o C= K x DO )

Calculo de Resultados:

·      Transformar las DO obtenidas en concentración (g/dl), en la curva de calibración.

·      Para obtener la concentración de Hemoglobina de la muestra debemos conocer la Constante (K).

·      La constante (K) la obtenemos de la solución estándar de HiCN.

·      Se divide la concentración (C) de la solución estándar de HiCN por la DO obtenida para esta.

Ejemplo

K= C/DO

Concentración       (gr/dl)		Estándar	Drabkin	D.O	K
100%	17.1	20ul	5 ml	0.498	X
75%	12.82	20ul	7.5ml	0.325	X
50%	8.55	20ul	10ml	0.243	X
25%	4.27	20ul	12.5ml	0.118	X

ESTANDAR DE HiCN =  17,1 g/dl

D.O del estándar  = 0.498

K= C/DO

K = 17.1/0.498

K = 34.33

Concentración       (gr/dl)		Estándar	Drabkin	D.O	K
100%	17.1	20ul	5 ml	0.498	34.33
75%	12.82	20ul	7.5ml	0.325	39.44
50%	8.55	20ul	10ml	0.243	35.18
25%	4.27	20ul	12.5ml	0.118	36.18

Ejemplo

Calculo de la concentración (C) de la Muestra:

K= 34.33

D.O de la muestra = 0.434

Concentración de la muestra (C= K x D.O)

C = 34.33 x 0.434

Hemoglobina de la Muestra = 14.9 g/dl

VALORES DE REFERENCIA:

Hombre: 14 - 18 g/dl  

Mujer : 12 - 16 g/dl   

Ancianos: los valores pueden estar ligeramente disminuidos

Sangre de cordón	18,0 gr/dl
1 semana	17,5 gr/dl
1 mes	14,0 gr/dl
3 a 6 meses	12,6 gr/dl
6 meses a 2 años	12,6 gr/dl
2 años a 6 años	12,5 gr/dl
6 a 12 años	13,5 gr/dl

RESULTADOS ANORMALES:

Nivel aumentado:
·      Cardiopatía congénita
·      Policitemia vera
·      Hemoconcentración de la sangre
·      Enfermedad pulmonar obstructiva crónica
·      Insuficiencia cardiaca congestiva
·      Grandes altitudes
·      Quemaduras graves
·      Deshidratación

Niveles disminuidos:
·      Anemia
·      Hemorragia grave
·      Hemolisis
·      Hemoglobinopatías
·      Cáncer
·      Déficit nutricional
·      Linfoma
·      Lupus eritematoso sistémico
·      Sarcoidosis
·      Enfermedad renal
·      Hemorragia crónica
·      Esplenomegalia
·      Anemia de células falciformes
·      Neoplasia